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脑脊液样本该如何收集与保存

2015/11/19 10:15:05编辑:shjmbio人气:2708

 如今,ELISA实验样本已不仅仅局限于血清、血浆组织了,更多时候广大科研者开始提取脑脊液作为研究对象。那么,脑脊液该如何提取跟保存呢?如果您心中也带着这个疑惑,请跟随我司技术部刘老师的脚步一起获知其中的奥秘。
脑脊液的采集 
1.狗、兔脑脊液的采集通常采取脊髓穿刺法:动物轻度麻醉后,侧卧位固定,使头部及尾部向腰部尽量弯曲,剪去第七腰椎周围的被毛。消毒后操作者在动物背部用左手姆、食指固定穿刺部位的皮肤,右手持腰穿刺针垂直刺入,当有落空感及动物的后肢跳动时,表明针已达椎管内( 蛛网膜下腔),抽去针芯,即见脑脊液流出。如果无脑脊液流出,可能是没有刺破蛛网膜。轻轻调节进针方向及角度,如果脑脊液流的太快,插入针芯稍加阻塞,以免导致颅内压突然下降而形成脑疝。 
2.大鼠脑脊液的采集可采用枕大孔直接穿刺法 
在大鼠麻醉后,头部固定于定向仪上。头颈部剪毛、消毒,用手术刀沿纵轴切一纵行切口(约2cm)用剪刀钝性分离颈部背侧肌肉。为避免出血,深层附着在骨上的肌肉用手术刀背刮开,暴露出枕骨大孔。由枕骨大孔进针直接抽取脑脊液。抽取完毕逢好外层肌肉、皮肤。刀口处可撒些磺胺药粉,防止感染。采完脑脊液后,应注入等量的消毒生理盐水,以保持原来脑脊髓腔的压力。 
脑脊液的保存条件
 
 
1.如果实验要求只是测定其中的蛋白含量的话,采集脑脊液后,离心1500g(左右)/10min(左右)。然后收集上清,分装保存于液氮[佳选择]-80度即可。(如果短时间内就使用,-20度也可以,但能保存于-80度)。整个过程是冰上操作。
2.保存过程中,避免反复冻溶,防止蛋白降解。
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